Генетических и фенотипическую изменчивость поведения и характеристик линии кукурузы MON 810 были изучены в ряде полевых условиях в Соединенных Штатах и В Европе с 1992 года. Оценка взаимодействия MON 810 с окружающей средой, включает исследования: восприимчивость к насекомым и болезням, выживаемость мощности (добровольцев); семян мощности (выход); Cry1Ab экспрессии белка в листьях и зерна, семян анализ состава, безопасность для птиц , а также безопасности для млекопитающих. Никаких существенных различий не наблюдается между этой линией и других сортов кукурузы, кроме защиты от некоторых насекомых чешуекрылых. режимы и / или скорость размножения обширные наблюдения записали на местах кооператоров в 1993, 1994 и 1995 полевых испытаний показывают, что режим и Скорость воспроизведения MON 810 характерны и для других сортов кукурузы. Эта линия кукурузы продолжает демонстрировать тот же отдельные тычиночные (кисть) и пестичные (шелк) функций. Пыльца была произведена полностью в мужских соцветий с цветения (пыльцы сарая) синхронно с появлением шелка. Никаких различий в зрелости семян и растений не наблюдается. В некоторых исследованиях, не насекомое защиты растений созрели быстрее из-за преждевременного старения вызваны стебель скучный повреждения насекомыми. уровни экспрессии Cry1Ab, CP4 EPSPS, GOX и NPTII БелкиБелки выражение в молодые листья, зерна, весь завод, и пыльца тканей собраны из шести отделений на местах в 1994 году определяется иммуноферментный анализ (ИФА) (Harlow & Lane, 1988) и Вестерн-блот (Мацудайра 1987). Результаты представлены в таблице 1. Доходность Характеристики Доходность сравнения для MON 810 и представитель управления были оценены в до девяти мест в США. Сравнение нетрансгенных гибрид с той же гибридной, в которой один из родителей был обратное скрещивание, полученные линии MON 810 не показали существенных различий между этими гибридами урожайности (табл. 2). болезнями и вредителями восприимчивостей MON 810 был испытан в США в течение шестьдесят насаждений по крайней мере в десять государств в дополнение к Пуэрто-Рико. Детальный мониторинг за заболеваниями и насекомыми восприимчивость этой линии по сравнению с нетрансгенных растений, контроль был выполнен в 1993 и 1994 годах. Завод экспертиза не ограничивается явно больные растения, здоровые растения были исследованы на аномальный рост и развитие субхроническое заболевание симптоматики. Никаких различий в агрономических качества, болезни или насекомого восприимчивость, кроме европейского контроля кукурузного мотылька были обнаружены между MON 810 и не трансгенных растений. Заболевания наблюдаются включены северные ожог листьев (Exserohilum turcicum), на юге ожог листьев (Bipolaris maydis), бактериального ожога листьев (Erwinia stewartii), общий головни кукурузы (Ustilago maydis), кукуруза вирус полосой и общий кукурузы ржавчины (Puccinia sorghi). насекомых защищенный гибридов кукурузы будет осуществляться производителем такой же, как они в настоящее время управляют ростом и производство гибридов кукурузы с тем исключением, что каждый производитель, как ожидается, необходимые для реализации плана управления насекомых устойчивости (см. Насекомые управления Сопротивления). Цель насекомое план управления, чтобы задержать или предотвратить целевую насекомых из здания сопротивление белка Cry1Ab.

Компания Monsanto великодушно согласилась на использование информации, содержащейся в различных своих нормативных представлений о событии MON 810 в качестве учебного пособия. Следует отметить, что в целях повышения эффективности использования примера в качестве учебного пособия, свободы были взяты с информацией, представленной в оригинале приложений. Некоторая информация была сведена к резюме и данные, представленные в случае исследования являются только часть того, что было на самом деле представлены. Пример в коей мере не представляет собой законченное приложение, ни это, чтобы считаться полной оценки безопасности. В связи с этим, использование этой информации в виде учебного пособия не означает одобрения информации или продукта и его не следует рассматривать как отражение любого из оригинальных материалов.
Эта учебная программа была разработана в качестве инструмент для обеспечения регуляторы с практической подготовки в оценке безопасности трансгенных растений. Понятие риска, как описано в этом тексте не отражают подход к регулированию какой-либо одной страны, а скорее были по образцу международных документов консенсуса, такие как, производимые Организацией экономического сотрудничества и развития (ОЭСР), Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) и Продовольственной и сельскохозяйственной организации ООН (ФАО) Организации Объединенных Наций. Для того, чтобы дать некоторое представление о типе данных обычно представляется в поддержку оценки безопасности, случай исследования с использованием генетически модифицированных кукурузы (Zea Mays) событие MON 810 и его потомство были разработаны. Содержание исследования включает в себя отрывки из заявок в регулирующие органы Европейского Союза, Соединенного Королевства (Великобритании), Японии и Соединенных Штатов Америки (США). кукуруза линии MON 810 (торговая марка YieldGard ®) была разработана на основе конкретных генетической модификации, чтобы быть устойчивыми к воздействию европейского кукурузного мотылька (ECB; Ostrinia nubilalis), крупнейший насекомого кукурузы в сельском хозяйстве. В романе множество производит усеченный вариант инсектицидных белков, Cry1Ab, полученный из бактерии Bacillus Thuringiensis . Дельта-эндотоксинов, таких как белок Cry1Ab выражается в MON 810, действуют выборочно привязки к определенным сайтам локализованы на кишке кисти границы эпителия восприимчивых видов насекомых. После связывания, катион конкретных образуются поры, которые разрушают кишки поток ионов и тем самым вызвать паралич и смерть. Cry1Ab является инсектицидным только чешуекрылых насекомых, и ее специфика действия, непосредственно связанные с наличием специфических сайтов связывания в целевых насекомых. Есть не сайты связывания для дельта-эндотоксинов B. Thuringiensis на поверхности клеток кишечника млекопитающих, таким образом, животноводство животные и люди не восприимчивы к этим белкам. событие MON 810 получила свой первый регулирующих органов в США в 1995 году (Министерство сельского хозяйства США), и с тех пор были одобрены для высвобождения в окружающую среду и использовать в корм скота и / или питания человека из числа стран, в том числе Аргентины, Канады, Японии, Южной Африки и Европейского союза.

Читать запись полностью »

Выделение ДНК: ДНК из MON 810 и линии управления ПН 818 был выделен из тканей молодых листьев собраны из парниковых выращиваемых растений из семян посеяно собран из полевых испытаниях (Sanders & Patzer 1995). Молодые ткани листа была удалена из теста растений, порошок в жидкий азот, и смешивается с примерно 6 мл нагретого (65 ° C) СТАВ буфера [2,6% (ш: ш) сорбит, 0,22 М Трис рН 8, 21 мМ ЭДТА, 0. 8 М NaCl, 22 мМ СТАВ, и 1% (вес / объем) N-laurylsarcosine]. Образцы инкубировали при 60 ° C в течение 30 минут и часто инвертируется. Смесь центрифугированием, супернатант экстрагировали фенол: хлороформ (1:1, об / об); хлороформ: изоамиловый спирт (24:1; об / об) и осаждают изопропанолом. ДНК осадок промывают 70% этанолом, высушивали в вакууме, и ресуспендируют в TE (10 мМ Трис-HCl, рН 8, 1 мМ ЭДТА). ДНК обрабатывают РНКазы, количественно, и хранится примерно в 4 ° С. Примерно 10-15 мкг изолированной геномной ДНК из опытной и контрольной линии были использованы для ограничения фермент переваривает. PV-ZMBK07 и PV-ZMGTIO плазмидной ДНК был использован для эталонов. Сборники проводились ферментов рестрикции приобрести Boehringer Mannheim (Indianapolis, IN). ДНК зонда Приготовление: Зонды гомологичныхcryIAb , CP4 EPSPS, GOX , NPTII и ори-PUC генетических регионах были подготовлены с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) или изолированных от PV-ZMBK07 и PV-ZMGT10 плазмиды ДНК с помощью рестриктазы пищеварения, агарозном геле разделения и очистки (Gene Чистая Kit, Bio 101, Vista, CA или QIAquick гель Добыча Kit, Qiagen, Chatsworth, CA). Все датчики были радиоактивно меченного 32 P методом случайной грунтовки (премьер-It ® II Случайно Kit грунтовка, Stratagene, Ла-Хойя, Калифорния). Южной блоттинг: Ограничение ферментов перевариваются образцы ДНК были отделены с помощью электрофореза в агарозном геле. В дополнение к образцу ДНК, два молекулярным весом (МВ) маркеры были смешаны вместе, работать на гель и дырок ткнул в полосах маркеров. После передачи, отверстия были отмечены точками водонепроницаемые краски, а затем с 35 S-меченый чернилами, эффективно передачи правильных стандартов размеров. Переулок содержащего молекулярный маркер точек вес не был проверен в цифрах. ДНК в агарозном гель был переведен в 20-кратный буфер SSC в Hybond-N ™ (Amersham, Arlington Heights, IL) нейлоновую мембрану помощью TurboBlotter (Шлейхер и Schuell, Кин, NH). ДНК ковалентно сшитые с мембраной с Stratalinker (Stratagene, Ла-Хойя, Калифорния). Блоты предварительно гибридизировали в 0,5 М Na 2 HP0 4 • 7H 2 0, 7% SDS, гибридизации с меченных от 14 до 16 часов примерно в 65 ° C, а затем промывали 40 мМ Na 2 HP0 4
7H 2 0. Среднее время экспозиции фильма были 1-3 дней.

подробное описание молекулярных характеристик модифицированных растений требуется для того, чтобы продемонстрировать, что разработчик критический анализ предприятия и его продукции, включая все новые и новые гены белков. Характеристика трансгенных растений на молекулярном уровне, используется для предоставления информации о: составе и целостности вставляется ДНК, число копий ДНК вставлен, количество сайтов, вставки, а также уровень экспрессии белка роман (ы) с течением времени и в различных тканях. Знание введены или изменены, генов, их регулирования, а также место интеграции в геном хозяина в случае трансгенных растений, может дать информацию о возможных прямых и косвенных последствий генетической модификации. Например, возможность неблагоприятного эффектов в результате инсерционного инактивации или активации, можно оценить, характеризующие соседние ДНК хозяина и избегать тех продуктов, содержащих трансгены в непосредственной близости от известных генов влияет на производство потенциально токсичных или аллергенных веществ. С другой стороны, молекулярная характеристика трансгенных растений, часто получает непропорционально много внимания со стороны регулирующих органов по отношению к информации, которую он передает в плане продовольствия, корма или экологической безопасности. В частности, причиной этого может быть то, что данные, полученные от молекулярного анализа, как правило, менее открыты для интерпретации данных, представленных чем отвечать на вопросы о, например, влияние трансгенных растений на биоразнообразие. Хотя информация о целостности и число копий введенного ДНК, как правило, требует со стороны регулирующих органов, нет никаких свидетельств того, что трансгенных растений, содержащих несколько копий ДНК вставлен менее «безопасный», чем аналогичные растения, содержащие только одну копию. Одним из примеров утвержденным событие содержащие большое количество копии трансгена касается линии рапса (Brassica париз ; 23-198 событие, 23-18), который был разработан путем введения гена thioesterase кодирование от Калифорнийского залива дерева (Umbellularia саЩогтса) в Для повышения уровня лауриновая кислота (12:0) и, в меньшей степени, миристиновая кислота (14:0). Исходное событие преобразование 23, по оценкам, 15 копий генов, в пяти независимых генетических локусов, как показано на южном пятно и сегрегации анализа. Важно подчеркнуть, что, в то время как необходимо, молекулярная характеристика введены (или изменения) ДНК не является достаточным средством прогнозирования возможных непредвиденных последствий и не является заменой для прямого измерения экспрессии генов или изменение уровня питательных веществ и антинутриентов, эндогенных токсикантов или потенциальных аллергенов. Потому что их метод производства трансгенных растений больше поддаются обширный молекулярно-генетические характеристики, чем сопоставимые растений, полученные с использованием других методов селекции. В этой связи важно проводить различие между « должен знать «и» хорошо знать «в контексте оценки безопасности. Этот вопрос имеет особое значение в Канаде, где регулирование новых продуктов и растений с новыми признаками включает продукты получены с использованием методов разведения, для которых предоставление детальной молекулярной информации не представляется возможным. В этих последних примеров, трудно утверждать, что оценка безопасности пострадал в результате неполной информации, последовательность ДНК. Короче говоря, когда после продукт на основе подхода к оценке рисков и регулирования, должны быть сопоставимые стандарты доказательств безопасности продукции, которые регулируются так, потому что они представляют эквивалентные рисков.

Возможные взаимодействия с другими организмами, такими как опылители, микоризы грибов, животных браузеров, птиц, почвенных микробов и почвенных насекомых
Подробные описания документов консенсуса биологии из следующих видов сельскохозяйственных культур были подготовлены ОЭСР (см. http://www. oecd. org/ehs/cd. htm): Oryza сатива (рис), Triticum AESTIVUM (хлеб),Solanum tuberosum (картофель) и Brassica париз (Аргентина изнасилование). Кроме того, Канадское агентство по инспекции пищевых продуктов опубликовало монографии по биологии B. париз, Б. рапа (польский изнасилование), Linum Usitatissimum (лен), Zea Mays (маис), С. tuberosum , глицин Макс (соя) и Т. AESTIVUM (см. http://www. inspection. gc. ca/english/plaveg/pbo/biodoce. shtml). Эти биологии документы могут быть использованы как в качестве надежного источника информации о видах, отзывы, и в качестве шаблонов для подготовки новых монографий. Важно, однако, отметить, что большая часть стоимости биологии документов заключается в конкретной стране информации о видов растений. Консенсус документы, такие как опубликованные ОЭСР должны быть дополнены с учетом региональных условий. Новые черты Генная инженерия позволяет ввести новые генетические элементы, которые могут привести к выражению нового признака или модификации существующих. Экологический риск выпуска генетически модифицированных растений, однако, не определяется новизной генетических элементов, используемых для преобразования, но новизной самого растения. Полезная информация может быть получена из оценки того черта выражается в трансгенных растений похожи на черты уже введены в том, что виды растений. Например, потенциальные последствия внедрения гена устойчивости к грибковым на сохранение трансгенные растения могут быть направлены, в частности, по оценке о том, что обычно разводят сорта с тем же грибковых черта сопротивление было, когда они были освобождены. сельскохозяйственных или лесохозяйственных мероприятий Изменения в сельскохозяйственной практике, связанных с внедрением новых сортов растений, в том числе, но не ограничиваясь, трансгенные растения, могут иметь значительные экологические последствия. Широкое культивирование устойчивой к гербицидам (HT) B. париз (канолы) в канадских прериях привела фермеров перейти на «не-до» культивирования. Фермеры могут семян рапса HT прямо в стерню ранее урожая без предварительной обработки. Это обеспечивает и сохранение почв (верхний слой почвы проводится на месте остатков предыдущего урожая) и водных ресурсов (стерня крышки позволяет лучше удерживать влагу и препятствует испарению). Трансгенные растения, экспрессирующие гены стрессоустойчивости пользуются большим спросом, особенно для Производство в почвах повреждены засоления или подщелачивание, или в местах, где вода является ограничивающим фактором для производства продуктов питания. Стресс толерантность может быть использован для расширения типичных зонах производства сельскохозяйственной культуры. Например, холоду считается желательной черты, как это может быть использовано для ограничения морозов повреждения сельскохозяйственных культур и, следовательно, расширить производство сезонов. Холодная терпимость может также разрешить введение новых растений в районах, где они ранее не выросли. Это приближает внедрение экзотических видов и так же требует тщательного изучения потенциального нарушения экосистемы.